Диагностика сифилиса

Методы диагностики сифилиса

Статистика заболеваемости сифилисом в России улучшается год от года. Однако ежегодно на тестированиях выявляют тысячи заболевших людей. Обследования на эту болезнь проводят и перед беременностью, и перед любой плановой госпитализацией. Кроме того, ежегодно представители многих профессий проходят диспансеризацию, при которой, кроме всего прочего, нужно сдать анализы на сифилис. И, разумеется, без этого анализа для человека будет закрыта карьера государственного служащего, врача, да и просто вакансии вроде учителей, поваров, воспитателей.

Как диагностировать сифилис?

Современная медицина знает множество способов обнаружить бледную трепонему, которая является возбудителем болезни, в крови человека. Эти методы разделяют на несколько больших групп:

  1. В первой группе исследований — тесты, при которых в биоматериале ищут присутствие трепонемы. Для этого на исследования забирают материал из язв или пораженных болезнью органов.
  2. Вторая, серологическая группа методов позволяет выявить косвенные следы присутствия трепонемы в организме. Здесь подразумеваются антитела, активной выработкой которых организм реагирует на инфекцию.

Мнение эксперта Артем Сергеевич Раков, врач-венеролог, стаж более 10 лет Прямые тесты отлично работают при первых симптомах заболевания, серологические стоит проводить примерно через неделю после появления первой язвы. Иными словами, при подозрении на заражение лучше всего прибегнуть к тестам прямого типа.

Лабораторное исследование заключается в том, что в пробирке размножают участки ДНК трепонемы в условиях повторяющихся температурных циклов. На каждом этапе количество искусственно воспроизведенных копий возбудителя болезни удваивается. Специалисты называют это амплификацией фрагментов ДНК. Происходит разделение молекул по их весу, что и позволяет выявить трепонему.

ПЦР

Методика ПЦР-исследования позволит отыскать одну молекулу сифилиса даже в том случае, если она одна на тысячи других молекул. Генетический материал для ПЦР-тестирования могут забирать из непосредственно сифилитических язв, ликвора, плацентарной ткани, крови из пальца и даже семенной жидкости. Наиболее часто врачи используют именно тканевую жидкость из язв.

Эффективность ПЦР-исследования достигает 98,6%. При правильно подготовленном исследовании ложноположительные результаты при этом методе практически исключены. Также именно к данной методике врачи прибегают, если предполагают небольшое содержание трепонем в исследуемом материале. Именно этот фактор становится определяющим, если необходимо провести анализ при подозрении на врожденный сифилис.

Темнопольная микроскопия

Темнопольное микроскопическое исследование считается одним из самых дешевых, но вместе с тем эффективных методов выявления наличия бледной трепонемы, а также:

  1. Для исследования используют специальный солевой раствор, в который помещают препарат. После этого на предметное стекло направляют узкий пучок яркого света. Из-за так называемого феномена Тиндаля возбудители болезни начинают светиться в темном поле раствора.
  2. Лучшим материалом для подобного типа исследования также являются пробы тканевой жидкости, полученной из генитальных язв, расположенных, соответственно, на гениталиях. Это один из самых быстрых тестов, потому что результаты анализов будут готовы через несколько часов.

Однако стоит учитывать, что темнопольный метод годится для обнаружения еще живых трепонем. Соответственно, проходить такое исследование после начала наружного лечения практически не имеет смысла, так как будет почти невозможно обнаружить живые образцы возбудителя.

RIT-тест

RIT-тест предполагает пересаживание материала от зараженного человека лабораторным кроликам. Чувствительность этих животных к инфекции сифилиса достигает 100%, так что если в биоматериале пациента содержались бледные трепонемы, то они поразят и кролика.

Однако на сегодняшний день этот метод практически не используют в силу дороговизны и временных затрат. При наличии более быстрых анализов врачи предпочитают не ждать, когда симптомы болезни проявятся у животного. Тем не менее этот метод продолжают использовать в исследовательских работах, а также для того, чтобы подтвердить или опровергнуть точность других типов анализов.

Серодиагностика сифилиса

Серологические методы позволяют вычленить не сам возбудитель сифилиса в организме, а антитела, с помощью которых организм старается победить заболевание. Ученые подразделяют серологические методы на две группы, речь о которых пойдет ниже.

К нетрепонемным тестам относятся:

  • РМП — реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой;
  • RPR — тест быстрых плазменных реагинов.

Чаще всего специалисты прибегают к нетрепонемным тестам в том случае, если необходимо сделать массовый скрининг на сифилис. Это связано с тем, что такие тесты достаточно дешевы, не требуют специального лабораторного оборудования и отличаются сравнительно высокой точностью.

Также они не менее эффективны при оценке проводимого лечения. С их помощью можно оперативно следить за уровнем антител к сифилису в крови.

К трепонемным тестам относятся:

  1. ИФА — иммуноферментный анализ;
  2. РПГА — реакция пассивной гемагглютинации;
  3. РИФ — реакция иммунофлюоресценции;
  4. иммуноблоттинг;
  5. ИХЛ — иммунохемилюминесценция;
  6. РИБТ (РИТ) — реакция иммобилизации бледных трепонем.

Трепонемные тесты назначают в тех случаях, когда нужно убедиться, что результат нетрепонемного теста не был ложноположительным. К ним же прибегают в тех случаях, если результат скрининга при помощи трепонемного теста разошелся с результатом нетрепонемного.

Кроме того, трепонемные тесты отлично подходят для применения в том случае, если у болезни еще нет видимых проявлений, но присутствуют подозрения врача, основанные на анамнезе и результатах осмотра. К сожалению, нетрепонемные тесты в этот период малоэффективны и зачастую дают ложноотрицательные результаты.

Этот тип диагностики наиболее часто используется для определенных групп пациентов:

  • Подобным тестом стоит воспользоваться каждой беременной женщине, чтобы обезопасить и себя, и будущего ребенка.
  • Кроме того, воспользоваться таким методом могут люди, которые проживают в одном помещении с сифилитическими больными, не применяют контрацепцию и часто меняют половых партнеров. Также он подойдет тем, кто не может пройти полноценное обследование в больнице или клинике.

Принцип использования экспресс-теста на сифилис можно сравнить с использованием теста на беременность, однако в нем надо брать несколько капель крови.

Тест лучше всего проводить в первой половине дня натощак. За два дня до предполагаемого тестирования врачи рекомендуют не употреблять спиртное, а примерно за час до процедуры отказаться от сигарет.

Сам анализ занимает немного времени:

  1. Палец необходимо продезинфицировать спиртовой салфеткой, после чего из пореза выдавить несколько капель крови на тест-устройство.
  2. Затем добавить туда же идущий в комплекте реагент.
  3. В среднем нужно подождать 15 минут до появления результата. Специалисты предупреждают, что если результат появился по истечении получаса, то он может быть ложным.

Как вы считаете, какой метод диагностики самый точный? СеродиагностикаЭкспресс-диагностика

Стоит учитывать, что если человек заразился совсем недавно, то точность и достоверность подобного тестирования не превышает 80%. Так что приравнивать его к полноценному обследованию у специалиста точно не стоит.

Где можно сдать анализ на сифилис?

Заказать исследование биоматериала на сифилис можно:

  • в любой поликлинике;
  • частной клинике;
  • лаборатории.

Преимущество бюджетных учреждений состоит в том, что там эта услуга бесплатна. Существенный минус заключается во времени ожидания анализа, слабом материально-техническом обеспечении некоторых государственных поликлиник и в том, что если сифилис выявят, то скрыть этот факт будет затруднительно.

Частные клиники и лаборатории согласны работать с пациентами на условиях конфиденциальности. Это подойдет тем, кто не хотел бы, чтобы о его заболевании стало известно. Но следует помнить, что бланк с результатом, где не фигурирует имя пациента, не подлежит приему ни в одной организации.

Разумеется, за анализ в частном учреждении придется заплатить, но и результат можно будет узнать через 2-3 дня. Более того, многие клиники без проблем предлагают экспресс-тестирование и сообщают о результатах анализов уже через пару часов.

Сколько стоит сдать анализ на сифилис?

Ценник на анализ зависит от его вида. Скрининговое исследование обойдется пациенту в 300-400 рублей. Анализ, при котором определяют наличие ДНК в том или ином типе биоматериала, будет стоить в районе 500 рублей.

Разумеется, цены варьируются в зависимости от лабораторий, используемых материалов и итоговой точности самого теста. В этом случае нередко работает правило, согласно которому чем тест дороже, тем он точнее.

Сифилис — коварное заболевание, которое медленно, но верно не только уничтожает внутренние органы, но и затрагивает всю нервную систему человека. К счастью, эта болезнь развивается неспешными темпами, а наука выявила эффективные методы борьбы с ней еще в то время, когда изобрела пенициллин, к которому трепонемы уязвимы до сих пор. Так что главное — вовремя пройти качественное обследование, а после этого обратиться к знающему врачу.

Также вы можете посмотреть видео в этой статье, где врач расскажет вам о РИФ анализе на сифилис.

Сифилис

Первичный сифилис начинается с того момента, когда в месте внедрения бледных спирохет появляется первичная сифилома – твёрдый шанкр. Твёрдый шанкр – это одиночная, округлой формы эрозия или язва, имеющая чёткие, ровные края и блестящее синюшно – красное дно, безболезненная и невоспаленная. Шанкр не увеличивается в размерах, имеет скудное серозное содержимое или покрыт пленкой, корочкой, в основании его ощущается плотный безболезненный инфильтрат. Твердый шанкр не поддается местной антисептической терапии.

Шанкр может находиться на любом участке кожи и слизистых (анальная область, ротовая полость – губы, уголки рта, миндалины; молочная железа, низ живота, пальцы рук), но чаще всего располагается на половых органах. Обычно у мужчин – на головке, крайней плоти и стволе полового члена, внутри уретры; у женщин — на половых губах, промежности, влагалище, шейке матки. Размеры шанкра около 1 см, но могут быть карликовые — с маковое зерно и гигантские (d =4-5 см). Шанкры могут быть множественными, в случае многочисленных мелких повреждений кожи и слизистых на момент заражения, иногда биполярными (на половом члене и губах). При появлении шанкра на миндалинах – возникает состояние, напоминающее ангину, при которой не повышается температура, и горло почти не болит. Безболезненность шанкра позволяет больным не замечать его, и не придавать никакого значения. Болезненностью отличаются щелевидный шанкр в складке анального отверстия, и шанкр – панариций на ногтевой фаланге пальцев руки. В период первичного сифилиса могут наблюдаться осложнения (баланит, гангренизация, фимоз) в результате присоединения вторичной инфекции. Неосложненный шанкр в зависимости от размера заживает через 1,5 – 2 месяца, иногда до появления признаков вторичного сифилиса.

Через 5-7 дней после возникновения твёрдого шанкра развивается неравномерное увеличение и уплотнение ближайших к нему лимфоузлов (чаще паховых). Может быть односторонним и двусторонним, узлы при этом не воспалены, безболезненны, имеют овоидную форму и могут достигать размера куриного яйца. Ближе к концу периода первичного сифилиса развивается специфический полиаденит – увеличение большинства подкожных лимфатических узлов. У больных может ощущаться недомогание, головная боль, бессонница, повышение температуры, артралгии, мышечные боли, невротические и депрессивные расстройства. Это связывают с сифилитической септицемией – распространением возбудителя сифилиса по кровеносной и лимфатической системе из очага поражения по всему организму. В отдельных случаях этот процесс протекает без лихорадки и недомогания, и переход от первичной стадии сифилиса к вторичной больной не замечает.

Вторичный сифилис начинается через 2—4 месяца после инфицирования и может длиться от 2 до 5 лет. Храктеризуется генерализацией инфекции. На этой стадии поражаются все системы и органы больного: суставы, кости, нервная система, органы кроветворения, пищеварения, зрения, слуха. Клиническим симптомом вторичного сифилиса являются – высыпания на коже и слизистых, которые носят повсеместный характер (вторичные сифилиды). Высыпания могут сопровождаться ломотой в теле, головной болью, лихорадкой и напоминать простуду.

Высыпания проявляются приступообразно: продлившись 1,5 – 2 месяца, без лечения исчезают (вторичный латентный сифилис), затем появляются снова. Первое высыпание характеризуется обильностью и яркостью окраски (вторичный свежий сифилис), последующие повторные высыпания — бледнее окрашены, менее обильные, но крупнее размерами и склонны к слиянию (вторичный рецидивный сифилис). Частота рецидивов и длительность латентных периодов вторичного сифилиса бывают различными и зависят от иммунологических реакций организма в ответ на размножение бледных спирохет.

Сифилиды вторичного периода исчезают без рубцов и имеют разнообразие форм — розеолы, папулы, пустулы.

Сифилитические розеолы представляют собой мелкие округлые пятна розового (бледно-розового) цвета, не поднимающиеся над поверхностью кожи и эпителия слизистых, которые не шелушатся и не вызывают зуд, при надавливании на них бледнеют и ненадолго исчезают. Розеолезная сыпь при вторичном сифилисе наблюдается у 75-80% больных. Образование розеол вызвано нарушениями в кровеносных сосудах, располагаются они по всему телу, в основном на туловище и конечностях, в области лица — чаще всего на лбу.

Папулезная сыпь представляет собой округлые узелковые образования, выступающие над поверхностью кожи, ярко-розового цвета с синюшным оттенком. Папулы располагаются на туловище, не вызывают никаких субъективных ощущений. Однако при надавливании на них пуговчатым зондом, появляется острая боль. При сифилисе высыпание папул с жирными чешуйками по краю лба образует, так называемую, «корону Венеры».

Сифилитические папулы могут разрастаться, сливаться друг с другом и образовывать бляшки, мокнуть. Особенно заразны мокнущие эрозивные папулы, и сифилис в этой стадии легко может передаваться не только при половых контактах, но и при рукопожатиях, поцелуях, пользовании общими предметами обихода. Пустулезные (гнойничковые) высыпания при сифилисе похожи на угревую или ветряную сыпь, покрыты коркой или чешуйками. Обычно возникают у больных с пониженным иммунитетом.

Злокачественное течение сифилиса может развиваться у ослабленных пациентов, а также у наркоманов, алкоголиков, ВИЧ-инфицированных. Для злокачественного сифилиса характерно изъязвление папуло-пустулезных сифилидов, непрерывные рецидивы, нарушение общего состояния, лихорадка, интоксикация, снижение массы тела.

У больных вторичным сифилисом может возникать сифилитическая (эритематозная) ангина (резко выраженное покраснение миндалин, с белёсыми пятнами, не сопровождающееся недомоганием и лихорадкой), сифилитические заеды в уголках губ, сифилис полости рта. Наблюдается общее легкое недомогание, которое может напоминать симптомы обычной простуды. Характерным для вторичного сифилиса является генерализованный лимфаденит без признаков воспаления и болезненности.

В период вторичного сифилиса возникают нарушения в пигментации кожи (лейкодерма) и выпадение волос (алопеция). Сифилитическая лейкодерма проявляется в потере пигментации различных участков кожи на шее, груди, животе, спине, пояснице, в области подмышек. На шее, чаще у женщин, может появляться «ожерелье Венеры», состоящее из мелких (3-10 мм) обесцвеченных пятен, окружённых более тёмными участками кожи. Оно может существовать без изменения длительно (несколько месяцев и даже лет), несмотря на проводимое противосифилитическое лечение. Развитие лейкодермы связывают с сифилитическим поражением нервной системы, при обследовании наблюдаются патологические изменения в спинномозговой жидкости.

Выпадение волос не сопровождается зудом, шелушением, по своему характеру бывает:

  • диффузное — выпадение волос типично для обычного облысения, происходит на волосистой части головы, в височной и теменной области;
  • мелкоочаговое — яркий симптом сифилиса, выпадение или поредение волос мелкими очагами, расположенными беспорядочно, на голове, ресницах, бровях, усах и бороде;
  • смешанное — встречается и диффузное, и мелкоочаговое.

При своевременно проведённом лечении сифилиса волосяной покров полностью восстанавливается.

При поражении сифилисом голосовых связок появляется осиплость голоса.

Кожные проявления вторичного сифилиса сопровождают поражения ЦНС, костей и суставов, внутренних органов.

Лабораторная диагностика сифилиса

Микроскопическое исследование

При первичном сифилисе исследуется на бледную трепонему отделяемое твердого шанкра или пунктат лимфатических узлов. При вторичном сифилисе материал берется с поверхности эрозированных папул на коже, слизистых, с трещин и др. Перед взятием материала с целью очищения от различных загрязнений поверхность очагов (эрозии, язвы, трещины) необходимо тщательно протереть стерильным ватно-марлевым тампоном, который смачивается изотоническим раствором хлорида натрия или назначить примочки с этим же раствором. Очищенную поверхность осушивают сухим тампоном и платиновой петлей или лопаточкой слегка раздражают периферические участки, одновременно слегка сдавливая пальцами в резиновой перчатке основание элемента до появления тканевой жидкости (серума), из которой готовят препарат для исследования. Получение тканевой жидкости имеет важное значение для диагностики сифилиса, так как бледные трепонемы находятся в просветах лимфатических капилляров, в тканевых щелях вокруг лимфатических и кровеносных сосудов.

Пункция регионарных лимфатических узлов

Кожу над лимфатическими узлами обрабатывают 96% спиртом и 3-5% спиртовым раствором йода. Затем 1 и 2 пальцами левой кисти фиксируют лимфатический узел. Правой рукой берут стерильный шприц с несколькими каплями изотонического раствора хлорида натрия, который вкалывается параллельно продольной оси лимфатического узла. Игла проталкивается в разных направлениях до противоположной стенки капсулы узла и содержимое шприца медленно вводится. Пальцами левой кисти лимфатический узел слегка массируется. При медленном извлечении иглы одновременно выдвигают поршень шприца, аспирируя содержимое лимфатического узла. Материал наносится на предметное стекло (при малом количестве материала добавляется капля изотонического раствора хлорида натрия), покрывается покровным стеклом. Исследование нативного препарата проводится в темном поле зрения при помощи светооптического микроскопа с темнопольным конденсором (объектив 40, 7х, 10х или 15х). Бледные трепонемы могут обнаруживаться также в окрашенных препаратах. При окраске по Романовскому-Гимзе бледные трепонемы окрашиваются в розовый цвет, по Фонтану и Морозову в коричневый (черный), по методу Бурри неокрашенные трепонемы выявляются на темном фоне. Важное значение в диагностике сифилиса, оценке эффективности лечения, установлении критерия излеченности, выявления скрытых, резистентных форм придается стандартным (классическим) и специфическим серологическим реакциям. К стандартным или классическим серологическим реакциям (КСР) относятся:

  • Реакция Вассермана (РВ),
  • осадочные реакции Кана и Закса-Витебского (цитохолевая),
  • реакция на стекле (экспресс-метод),

к специфическим:

  • реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ),
  • реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция Вассермана (РВ)

— разработана А.Вассерманом (A.Wasserman) совместно с А.Нейссером (A.Neisser) и Ц.Бруком (C.Bruck) в 1906 году. Реакции Вассермана основана на феномене связывания комплемента (реакция Борде-Жангу) и позволяет определять противолипидные антитела (реагины). Согласно современным представлениям, в реакции Вассермана определяются антитела к липидам макроорганизма, а не бледной трепонемы и реакция выявляет аутоиммунный процесс, который вызывается денатурированием бледными трепонемами тканей макроорганизма с образованием липопротеидного комплекса (конъюгата), в котором липиды (гаптены) являются детерминантой.

Обычно РВ ставится с двумя или тремя антигенами. Наиболее часто применяется отличающийся высокой чувствительностью кардиолипиновый антиген (экстракт из сердца быка, обогащенный холестерином и лецитином) и трепонемный антиген (обработанная ультразвуком взвесь анатогенных культуральных бледных трепонем). Совместно с реагинами сыворотки крови больного эти антигены образуют иммунный комплекс, способный адсорбировать и связывать комплемент. Для визуального определения образованного комплекса (реагины + антиген + комплемент) в качестве индикатора применяется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент связан в 1 фазе реакции (реагины + антиген + комплемент), гемолиз не наступает — эритроциты выпадают в легко заметный осадок (РВ положительная). Если в 1 фазе комплемент не связан вследствие отсутствия в испытуемой сыворотке реагинов, он будет использован гемолитической системой и произойдет гемолиз (РВ отрицательная). Степень выраженности гемолиза при постановке РВ оценивается плюсами: полное отсутствие гемолиза ++++ или 4+ (РВ резкоположительная); едва начавшийся гемолиз +++ или 3+ (РВ положительная); значительный гемолиз ++ или 2+ (РВ слабоположительная); непонятная картина гемолиза ± (РВ сомнительная); полный гемолиз — (реакция Вассермана отрицательная).

Помимо качественной оценки РВ имеется количественная постановка с различными разведениями сыворотки (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Титр реагинов определяется максимальным разведением, еще дающим резко положительный (4+) результат. Количественная постановка РВ имеет значение в диагностике некоторых клинических форм сифилитической инфекции, а также при проведении контроля за эффективностью лечения. В настоящее время реакция Вассермана ставится с двумя антигенами (кардиолипиновый и трепонемный озвученный штамм Рейтера). Как правило, РВ становится положительной на 5-6 неделе после заражения у 25-60% больных, на 7-8 неделе — у 75-96%, на 9-19 неделе — у 100%, хотя в последние годы иногда раньше или позже. При этом, титр реагинов постепенно нарастает и достигает максимальной величины (1:160-1:320 и выше) в случае появления генерализованных высыпаний (сифилис вторичный свежий). При позитивации РВ выставляется диагноз первичного серопозитивного сифилиса.
При вторичном свежем и вторичном рецидивном сифилисе РВ положительная у 100% больных, но у истощенных больных с ослабленным иммунитетом может наблюдаться отрицательный результат. Впоследствии титр реагинов постепенно понижается и при вторичном рецидивном сифилисе обычно не превышает 1:80-1:120.
При третичном сифилисе РВ положительная у 65-70% больных и обычно наблюдается низкий титр реагинов (1:20-1:40). При поздних формах сифилиса (сифилис внутренних органов, нервной системы) положительная РВ наблюдается в 50-80% случаев. Титр реагинов колеблется от 1:5 до 1:320.
При скрытом сифилисе положительная РВ отмечается у 100% больных. Титр реагинов от 1:80 до 1:640, а при позднем скрытом сифилисе от 1:10 до 1:20. Быстрое снижение титра реагинов (вплоть до полной негативации) во время лечения свидетельствует об эффективности лечения.

Недостатки реакции Вассермана — недостаточная чувствительность (в начальной стадии первичного сифилиса отрицательная). Она негативная также у 1/3 больных, если они в прошлом лечились антибиотиками, у пациентов третичным активным сифилисом с поражениями кожи и слизистых, костно-суставного аппарата, внутренних органов, центральной нервной системы, при позднем врожденном сифилисе.
Недостаточная специфичность — реакция Вассермана может быть положительная у лиц, которые ранее не болели и не болеют сифилисом. В частности ложноположительные (неспецифические) результаты РВ отмечаются у больных, которые страдают системной красной волчанкой, лепрой, малярией, злокачественными новообразованиями, поражениями печени, обширными инфарктами миокарда и другими заболеваниями, а иногда у совершенно здоровых людей.
Кратковременная ложноположительная реакция Вассермана выявляется у некоторых женщин перед родами или после них, у лиц, злоупотребляющих наркотиками, после наркоза, приема алкоголя. Как правило, ложноположительная РВ выражена слабо, чаще с низким титром реагинов (1:5-1:20), положительная (3+) или слабо положительная (2+). При массовых серологических обследованиях частота ложноположительных результатов составляет 0,1-0,15%. Для преодоления недостаточной чувствительности, пользуются постановкой на холоде (реакция Колляра) и одновременно она ставится с другими серологическими реакциями.

Осадочные реакции Кана и Закса-Витебского

Реакция Вассермана применяется в комплексе с двумя осадочными реакциями (Кана и Закса-Витебского), при постановке которых готовятся более концентрированные антигены. Экспресс метод (микрореакция на стекле) — относится к липидным реакциям и основан на реакции преципитации. Ставится со специфическим кардиолипиновым антигеном, 1 каплю которого смешивают с 2-3 каплями исследуемой сыворотки крови в лунках специальной стеклянной пластины.
Преимущество — быстрота получения ответа (через 30-40 мин). Результаты оцениваются по количеству выпавшего осадка и величины хлопьев. Выраженность определяют как КСР — 4+, 3+, 2+ и отрицательная. Следует отметить, что ложноположительные результаты наблюдаются чаще, чем при РВ. Как правило, экспресс-метод применяется при массовых обследованиях на сифилис, при обследовании в клинико-диагностических лабораториях, соматических отделениях и больницах. На основании результатов экспресс-метода диагноз сифилиса выставлять запрещается, исключается его применение у беременных, доноров, а также для контроля после лечения.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) — предложена в 1949 году Р.Нельсоном (R.W.Nelson) и М.Мейером (M.Mayer). Является наиболее специфичным диагностическим тестом на сифилис. Однако сложность и дороговизна постановки ограничивает ее применение. В сыворотке крови больных производится определение видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые приводят к неподвижности бледных трепонем в присутствии комплемента. Антигеном являются живые патогенные бледные трепонемы, выделяемые от зараженных сифилисом кроликов. С помощью микроскопа проводится посчет утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем и оцениваются результаты РИБТ: иммобилизация бледных трепонем от 51 до 100% — положительная; от 31 до 50% — слабо положительная; от 21 до 30% — сомнительная; от 0 до 20% — отрицательная.
РИБТ имеет значение при дифференциальной диагностике для отграничения ложноположительных серологических реакций от реакций, обусловленных сифилисом. Поздно становится положительной чем РВ, РИФ и поэтому для диагностики заразных форм сифилиса ее не применяют, хотя во вторичном периоде сифилиса она положительная у 85-100% больных.
В третичном периоде сифилиса с поражением внутренних органов, опорно-двигательного аппарата, нервной системы РИБТ положительная в 98-100% случаев (РВ часто отрицательная).
Необходимо помнить, что РИБТ может оказаться ложноположительной в случае наличия в исследуемой сыворотке трепонемоцидных препаратов (пенициллин, тетрациклин, макролиты и др.), которые вызывают неспецифическую иммобилизацию бледных трепонем. С этой целью кровь на РИБТ исследуется не ранее 2 недель после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.
РИБТ как и РИФ в процессе лечения медленно негативируются, поэтому она не применяется в качестве контроля в процессе лечения.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — разработана в 1954 году A.Coons и впервые применена для диагностики сифилитической инфекции Deacon, Falcone, Harris в 1957 году. РИФ основана на непрямом методе определения флюоресцирующих антител. Антигеном для постановки являются фиксированные на предметных стеклах тканевые патогенные бледные трепонемы, на которые наносят исследуемую сыворотку. Если в исследуемой сыворотке имеются противотрепонемные антитела, относящиеся к IgM и IgG, они прочно связываются с антигеном — трепонемами, что выявляется в люминесцентном микроскопе с помощью антивидовой («противочеловеческой») флюоресцирующей сыворотки.
Результаты РИФ учитываются по интенсивности свечения бледных трепонем в препарате (желто-зеленое свечение). При отсутствии противотрепонемных антител в сыворотке, бледные трепонемы не определяются. При наличии антител выявляется свечение бледных трепонем, степень которого выражается в плюсах: 0 и 1+ — отрицательная реакция; от 2+ до 4+ — положительная.
РИФ относится к групповым трепонемным реакциям и ставится в разведении исследуемой сыворотки в 10 и 200 раз (РИФ-10 и РИФ-200). РИФ-10 считается более чувствительной, однако часто выпадают неспецифические положительные результаты, чем при постановке РИФ-200 (отличается более высокой специфичностью). Как правило, РИФ становится положительной раньше, чем РВ — положительная при первичном серонегативном сифилисе у 80% больных, у 100% во вторичном периоде сифилиса, всегда положительная при скрытом сифилисе и в 95-100% случаев при поздних формах и врожденном сифилисе.
Специфичность РИФ повышается после предварительной обработки исследуемой сыворотки сорбентом-ультраозвученным трепонемным антигеном, который связывает групповые антитела (РИФ — абс).
Показания к постановке РИБТ и РИФ — диагностика скрытого сифилиса для подтверждения специфичности комплекса липидных реакций в случае предположения сифилитической инфекции на основании положительной РВ. Положительные РИБТ и РИФ являются доказательством латентного сифилиса. При ложноположительной РВ при различных болезнях (системная красная волчанка, злокачественные новообразования и др.) и если повторные результаты РИБТ и РИФ отрицательные, это свидетельствует о неспецифическом характере РВ. Подозрение на поздние сифилитические поражения внутренних органов, опорно-двигательного аппарата, нервной системы при наличии у больных отрицательной РВ. Подозрение на первичный серонегативный сифилис, когда у пациентов при многократных исследованиях отделяемого с поверхности эрозии (язвы), при пунктате из увеличенных регионарных лимфатических узлов бледная трепонема не обнаруживается — в этом случае ставится только РИФ — 10.
При обследовании лиц с отрицательной РВ, которые имели длительные половые и бытовые контакты с больными сифилисом, учитывая вероятную возможность лечения их в недавнем прошлом противосифилитическими препаратами, вызвавшими негативацию РВ. Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA — enzymelinked immunosorbent assay) — метод разработан E.Engvall и соавт., S.Avrames (1971). Сущность состоит в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя с антителом исследуемой сыворотки крови и выявлении специфического комплекса антиген-антитело при помощи меченной ферментом антивидовой иммунной сыворотки крови. Это позволяет оценивать результаты ИФА визуально по степени изменения окраски субстрата под действием фермента, входящего в состав конъюгата. Недостоверные результаты ИФА могут возникать в результате недостаточного разведения инградиентов, нарушения температурного и временного режимов, несоответствии рН растворов, загрязнении лабораторной посуды, неправильной технике промывки носителя.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

Предложена в качестве диагностического теста на сифилис T.Rathlev (1965,1967), T.Tomizawa (1966). Макромодификация реакции называется ТРНА, микромодификация — МНА-ТР, автоматизированный вариант — AMNA-TR, реакция с макрокапсулами из полимочевины вместо эритроцитов — МСА-ТР. Чувствительность и специфичность РПГА аналогичны РИБТ, РИФ, но РПГА имеет меньшую чувствительность при ранних формах сифилиса по сравнению с РИФ-абс и большую при поздних, при врожденном сифилисе. РПГА ставится в качественном и количественном вариантах.

Техника взятия крови для серологических реакций

Для исследования на РВ, РИФ, РИБТ кровь берут из локтевой вены натощак или не раньше 4 час после приема пищи стерильным шприцом или одной иглой (самотеком). В месте взятия кожу предварительно обрабатывают 70% спиртом. Шприц и игла должны быть промыты изотоническим раствором хлорида натрия. В чистую сухую холодную пробирку вливают 5-7 мл исследуемой крови. На пробирку клеится чистая бумага с фамилией, инициалами пациента, номером истории болезни или амбулаторной карты, датой взятия крови. После взятия крови пробирка помещается в холодильник с температурным режимом +4°+8°С до следующего дня. На следующий день сыворотка сливается для исследования. В случае не использования крови на следующий день, сыворотку необходимо слить со сгустка и хранить в холодильнике не более 1 недели. Для исследования на РИБТ пробирка должна быть специально подготовлена и стерильна. В случае нарушения правил забора крови на исследование, несоблюдение условий может произойти искажение результатов.
Не рекомендуется производить забор крови для исследования после приема пищи, алкоголя, различных медикаментозных препаратов, после введения различных вакцин, во время менструального цикла у женщин.
Для исследования на экспресс-метод кровь берегся из кончика пальца, как это делается при ее взятии на СОЭ, но берут кровь на 1 капилляр больше. Экспресс-метод можно также ставить с сывороткой крови, полученной при помощи венопункции. Если возникает необходимость исследования крови в отдаленных лабораториях, вместо крови можно пересылать сухую сыворотку (метод сухой капли). Для этого на следующий день после взятия крови, сыворотку отделяют от сгустка и набирают в стерильный шприц в количестве 1 мл. Затем сыворотку выливают в виде 2 отдельных кружков на полоску плотной писчей бумаги (вощаная бумага или целлофан) размером 6×8 см. На свободном крае бумаги пишется фамилия, инициалы обследуемого и дата забора крови. Бумагу с сывороткой защищают от прямых солнечных лучей и оставляют при комнатной температуре до следующего дня. Сыворотка засыхает в виде небольших кружочков блестящей желтоватой стекловидной пленки. После этого, полоски бумаги с высушенной сывороткой свертывают как аптечный порошок и отсылают в лабораторию, указывая диагноз и с какой целью исследуется.

Серологическая резистентность

У части (2% и более) больных сифилисом, несмотря на проведенную полноценную противосифилитическую терапию, наблюдается замедление (отсутствие) негативации серологических реакций после окончания лечения до 12 мес и более. Возникает так называемая серологическая резистентность, которая в последние годы стала часто наблюдаться. Различают формы серологической резистентности:

  • Истинная (абсолютная, безусловная) — необходимо провести дополнительное противосифилитическое лечение, комбинируя с неспецифической терапией для повышения иммунных сил организма.
  • Относительная — после полноценного лечения бледные трепонемы образуют цист- или L-формы, которые находятся в организме в маловирулентном состоянии и вследствие этого дополнительное лечение не изменяет показатели серологических реакций, особенно РИФ и РИБТ.

В то же время в цист-формах происходят незначительные обменные процессы, а оболочки цист-форм являются чужеродным белком (антигеном). Для своей защиты организм вырабатывает специфические антнтела, которые положительны или резко положительны при постановке серологических реакций, отсутствии проявлений заболевания. При L-формах обменные процессы более снижены и антигенные свойства отсутствуют или незначительно выражены. Специфические антитела не вырабатываются или они в небольшом количестве, серологические реакции слабо положительные или отрицательные. Чем больший период времени от момента заражения, тем большее количество бледных трепонем трансформируется в формы выживания (цисты, споры, L-формы, зерна), при которых противосифилитическая терапия не эффективна.

Псевдорезистентность — после проведенного лечения несмотря на положительные серологические реакции бледная трепонема в организме отсутствует. Антигена в организме нет, но продолжается выработка антител, которые фиксируются при постановке серологических реакций.
Серологическая резистентность может развиваться вследствие:

  • неполноценного лечения без учета давности и стадии заболевания;
  • недостаточной дозы и в частности из-за неучета массы тела пациентов;
  • нарушения интервала между введением препаратов;
  • сохранения в организме бледных трепонем несмотря на проведенное полноценное специфическое лечение, из-за их стойкости к пенициллину и другим химиопрепаратам в случае наличия скрытых, осумкованных очагов поражения во внутренних органах, нервной системе, лимфатических узлах, которые малодоступны для антибактериальных препаратов (нередко бледные трепонемы обнаруживаются в тканях рубца через много лет после окончания терапии, в лимфатических узлах иногда удается обнаружить бледные трепонемы через 3-5 лет после противосифилитической терапии);
  • снижения защитных сил при различных заболеваниях и интоксикациях (эндокринопатии, алкоголизм, наркомания и др.);
  • общего истощения (приемом пищи бедной витаминами, белками, жирами).

Кроме этого, нередко выявляется ложная позитивация серологических реакций, не связанная с наличие у больных сифилиса и вызванная:

  • сопутствующими неспецифическими заболеваниями внутренних органов, нарушениями сердечнососудистой системы, ревматизмом, дисфункциями эндокринной и нервной систем, тяжелыми хроническими дерматозами, злокачественными новообразованиями;
  • поражениями нервной системы (тяжелые травмы, сотрясение головного мозга, психические травмы);
  • беременностью; хроническими интоксикациями алкоголем, никотином наркотиками; инфекционными болезнями (малярия, туберкулез, вирусный гепатит, дизентерия, сыпной, брюшной и возвратный тифы).

Указанные факторы могут оказывать влияние на иммунологическую реактивность организма как в период активного развития сифилитических проявлений, так и во время их регресса.

Диагностика сифилиса – современные методы микробиологических и серологических исследований

Среди венерических заболеваний сифилис занимает первые позиции по распространенности. Заболевание передается от больного к здоровому преимущественно половым путем. Диагностика сифилиса – сложный, поэтапный процесс, который не всегда приносит результат.

Подозрение на сифилис – к какому врачу идти?

Большое распространение заболевание получило потому, что многие молодые люди просто не знают, как определить сифилис, какие обследования необходимо пройти. Лечением половых инфекций занимаются врачи венерологи или дерматовенерологи, так как в большинстве случаев подобные инфекции сопровождаются повреждением кожных покровов. Медики советуют с профилактической целью обследоваться каждому пациенту репродуктивного возраста. Болезнь часто протекает в скрытой форме, поэтому выявить ее можно не всегда.

Диагностические мероприятия по выявлению заболевания основываются на клинических и лабораторных данных. Диагноз «сифилис» ставится только после получения положительных результатов лабораторного исследования. Ранняя диагностика сифилиса исключает прогрессирование заболевания. Первичный сифилис определяется исследованием отделяемого твердого шанкра эрозивных папул. Среди основных методов лабораторной диагностики сифилиса необходимо выделить:

  1. Бактериоскопию.
  2. Серологическое исследование (специфическое и неспецифическое).
  3. Гистологию (при третичном сифилисе).
  4. Микроскопию (исследование нативного препарата, отделяемого эрозивных или язвенных высыпаний, пунктата из лимфоузла).

Микробиологическая диагностика сифилиса

Основу данного типа обследования составляет бактериоскопический метод диагностики сифилиса. Он предполагает обнаружение T.pallidum в материале, забранном из очагов воспаления:

  • твердый шанкр;
  • эрозивные нарушения;
  • лимфоузлы;
  • спинной мозг.

Предварительно врач протирает место забора материала тампоном с физраствором, затем раздражает поверхность эрозии специальной петлей, пока из нее не покажется тканевая жидкость.

При этом избегают смешивания материала с кровью. Жидкость помещается на предметное стекло. Препарат, полученный таким способом, исследуется с помощью микроскопа. Методы микробиологической диагностики сифилиса основываются на обнаружении возбудителя в материале. При отрицательном результате исследование проводят несколько дней подряд для полного исключения болезни.

Серологическая диагностика сифилиса

Для выявления и подтверждения диагноза «сифилис» в случае поздних и скрытых форм болезней основы диагностики составляет серологический метод. В большинстве случаев для диагностики сифилиса используют реакцию Вассермана. Метод предполагает исследование венозной крови пациентов, которые обнаруживают антитела к антигенам возбудителя. Такой анализ на бледную трепонему помогает выявить заболевание даже при отсутствии явных клинических симптомов.

В зависимости от состава используемых для диагностики веществ, серологические методы подразделяют на:

  1. Специфические (трепонемные).
  2. Неспецифические (нетрепонемные).

Трепонемные тесты

Трепонемные тесты – это метод диагностики, использующий в качестве основы специфические антигены Treponemapallidum. Метод используется как для постановки, так и для подтверждения диагноза, для дифференциальной диагностики сифилиса. Все специфические тесты имеют высокую чувствительность и точные результаты. Механизмы проведения специфических тестов неодинаковы, поэтому они имеют различные показания к применению. К трепонемным тестам относят следующие методы лабораторной диагностики сифилиса:

  1. Реакцию связывания комплемента (реакция Вассермана, РВ) с трепонемным антигеном – РСКт.
  2. Реакцию иммобилизации бледных трепонем – РИБТ.
  3. Реакцию иммунофлюоресценции – РИФ. Применяется в нескольких модификациях: РИФ-200 (FTA-200); РИФ-абс; РИФц – реакция иммунофлюоресценции с цельной кровью или спинномозговой жидкостью.
  4. Реакцию пассивной гемагглютинации – РПГА.
  5. Иммуноферментный анализ – ИФА.
  6. Иммуноблотинг.

Нетрепонемные тесты

Нетрепонемные тесты на сифилис используются в качестве отборочных и не подходят для окончательной диагностики, выставления диагноза. Они активно применяются для обследования больших групп населения с целью профилактических осмотров при возникновении неблагоприятной эпидемиологической ситуации. Тест обладает простотой проведения, имеет высокую чувствительность. Результат диагностики оценивается врачом. Чувствительность неспецифических тестов при ранних формах заболевания составляет около 70 %, а при вторичном сифилисе – 100 %.

К нетрепонемным тестам диагностики сифилиса относятся:

  1. RPR (RapidPlasmaReagins).
  2. Тест с инактивированной сывороткой – МРП (микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном).

Данные флокуляционные тесты характеризуются простотой оценки. В ходе реакции образуется комплекс «антиген + антитело», который формирует хлопья, различимые с помощью увеличительного стекла. Роль антигена в тесте выполняет кардиолипиновый антиген, который получают из сердечной мышцы быка. Связь с антигенами возбудителя сифилиса при этом отсутствует, поэтому тесты и получили название нетрепонемные.

Экспресс-диагностика сифилиса

Современные методы диагностики сифилиса предполагают выявление заболевания на ранних стадиях. В качестве метода экспресс-диагностики используется RapidPlasmaReagin(RPR). Тест направлен на определение концентрации в крови антител к возбудителю сифилиса. При заражении бледная трепонема в организме формирует защитные антитела IgG и IgM. Наличие их в образце забранной крови является косвенным доказательством присутствия в организме бледной трепонемы. Данная диагностика сифилиса помогает установить точный срок продолжительности заболевания, время инфицирования.

Анализы на сифилис – расшифровка

Современная лабораторная диагностика сифилиса основывается следующих методах:

  • нетрепонемный тест – RPR или VDRL;
  • трепонемные тесты – РИФ и РПГА.

В странах СНГ для диагностики сифилиса чаще применяют реакцию Вассермана, также реакцию иммобилизации бледных трепонем – РИБТ. Оценку полученных результатов производит только врач, который учитывает клинические проявления заболевания, стадию патологии, состояние пациента. С примерными результатами исследований можно ознакомиться в таблице ниже.ото

Дифференциальная диагностика сифилиса

Когда у врача после первичного осмотра возникает подозрение на сифилис, он направляет пациента для сдачи крови на RV. Если результаты исследования подтвердили наличие бледной трепонемы в организме, проводится дифференциальная диагностика с определением стадии заболевания. При первичном сифилисе чаще бывают положительными РИФ и ИФА, однако это не позволяет выставить диагноз «сифилис».

Диагностика вторичного сифилиса не вызывает затруднений – резким положительным является результат по всем серологическим реакциям. РИБТ положительна больше чем у 50 % больных. Третичная форма сифилиса практически не вызывает затруднений. Серологические реакции положительные в 50–90 % случаев. Диагностика скрытого серопозитивного сифилиса основывается на серологических реакциях с подтверждением результата с помощью РИБТ.

Диагностика сифилисаDiagnosis on syphilis

Как ставится диагноз сифилиса
Что такое серологическая диагностика сифилиса
Что такое нетрепонемные тесты
Что такое трепонемные тесты
Что такое иммуноблотинг
Какая динамика серореакций при сифилисе
Как интерпретировать тесты на сифилис
Положительные серореакции при отсутствии симптомов сифилиса
Где можно получить еще информацию

Как ставится диагноз сифилиса

Диагноз сифилиса ставиться на совокупности данных анамнеза,конфронтации,клинической картины и лабораторных данных,включающих обнаружение возбудителя и результатов серологического обследования.Подтверждение диагноза лабораторными данными обязательно.

В случае полного отсутствия возможности использования методов лабораторной диагностики сифилиса, Всемирная организация здравоохранения (1999 г.) и МЗ РФ ( приказ № 327 от 25.07.2003 г.) допускают использование так называемого синдромного (эпидемиологического) лечения сифилиса на основе клинико-анамнестических данных.

Методы диагностики,подтверждающие наличие сифилиcа

Наименование

Метод проведение

Подтверждающие признаки

Анамнез

Распрос больного

Подтвержденный диагноз сифилиса у полового партнера
Случайная половая связь без барьерного предохранения в период ,соответствующий инкубационному периоду
Наличие в прошлом высыпаний в области половых органов,увеличения лимфоузлов

Клинический осмотр

Осмотр половых органов,кожных покровов,слизистой рта,ануса
Пальпация высыпных элементов при их наличии
Пальпация периферических лимоузлов

Наличие характерных для различных периодов сифилиса поражений кожи и слизистых.
Увеличение лимфоузлов

Обнаружение T.pallidum в материале из очагов поражения,лимфатических узлов,амниотической жидкости,ликвора

Темнопольная микроскопия

Обнаружение типичных форм трепонемы

Прямая реакция иммунофлюоресценции (РИФ-Тр)

Наличие флюоресцирующих трепонем

Полимеразная цепная реакция
ПЦР

Обнаружение специфической ДНК T.pallidum

Нетрепонемные серологические тесты — обнаружение в сыворотке крови антител против фосфолипидов тканей,разрушенных сифилитической инфекцией и липидов мембраны Т.pallidum

Макроскопический тест
Тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins, RPR)

Положительный (позитивный)результат

Микроскопический тест
VDRL (Venereal Disease Research laboratory)
Количественный тест VDRL

Реакция связывания
комплимента
(Реакция Вассермана)

Трепонемные серологические тесты — обнаружение в сыворотки крови антител против антигенов бледной трепонемы

Реакция иммунофлюоресценции
РИФ (FTA)

Положительный (позитивный) результат

Реакция пассивной гемоагглютинации РПГА (TPHA)

Иммуноферментный анализ
ИФА (ELISA)

Иммуноблотинг

Реакция иммобилизации бледных трепонем РИБТ

Методы диагностики, подтверждающие наличие различных форм и осложнений сифилиса

Наименование

Формы и осложнения

Исследование ликвора

Нейросифилис

Ренгенография
аорты
длинных трубчатых костей
грудины
костей черепа
суставов

Ранний врожденный сифилис
Поздний врожденный сифилис
Третичный сифилис

Сурдологическое обследование

Неврит слухового нерва
Сифилитический лабиринтит

Офтальмологическое обследование

Неврит зрительного нерва
Паренхиматозный кератит

Также применяются и рутинные методы исследования — общие анализы крови и мочи,биохимический анализ крови и.т.д.

Что такое серологическая диагностика сифилиса

В большинстве случаев обнаружить возбудителя сифилиса невозможно или обнаружение
его затруднительно.Поэтому для диагностики сифилиса применяют так называемое серологическую диагностику,основанную на определении различных видов и классов антител,которые организм выработал с целью своей защиты от сифилитической инфекции т.е определяется не возбудитель инфекции,а как организм прореагировал на его появление.
Серологическое исследование (от от лат. serum — сыворотка) представляет собой лабораторный анализ плазмы каппилярной или венозной крови основаный на иммунологической реакции антиген-антитело.
В качестве антигенов используют фабрично изготовленные препараты,аналогичные по своей структуре антигенам липидов,появляющихся в организме при разрушении тканей бледной спирохетой,липидам ее мембран и специфическим молекулярным соединениям,входящих в состав мебраны бледной спирохеты (для этих целей используются очищенные и ультраозвученные штаммы трепонем или выделенные от них рекомбинантные антигены).
В лабораторных условиях к антигенам добавляется сыворотка крови обследуемого.Если в сыворотке (плазме) крови присутствуют антитела происходит реакция антиген-антитело и ее результаты обнаруживаются различными методами (положительный результат) при отсутствии антител реакция не происходит (отрицательный результат).Серологическую диагностику сифилиса осуществляют в следующих случаях.

Скрининг на сифилис
Массовое обследование определенных групп населения.Для скрининга применяются дешевые,простые и быстрые по исполнению тест системы,основанные на нетрепонемных тестах.Скринингу на сифилис подвергаются:

  • Беременные женщины
  • Доноры крови и органов для трансплантации
  • Некоторые профессиональные контингенты (работники питания,образования,здравоохранения)
  • Военнослужащие
  • Лица,отбывающие наказание в местах лишения свободы
  • Больные,готовящиеся к оперативному хирургическому вмешательству
  • Лица,поступившие на стационарное лечение (обязательная вассерманизация — в России,странах СНГ и некоторых других странах)

Диагностика сифилиса
Для диагностики сифилиса применяются комбинация нетрепонемных и трепонемных тестов на сифилис или только трепонемные (подтверждающие) реакции.Серологическое обследование на сифилис назначается в следущих случаях:

  • Лицам,имеющих клинические признаки сифилиса
  • Лицам с любыми генитальными язвами
  • Лицам — половым партнерам больных сифилисом,а также в случае близкого бытового контакта с больным вторичным сифилисом
  • Детям,родившимся от больных сифилисом матерей
  • Лицам с подтвержденным диагнозом других половых инфекций
  • Для подтверждения результатов скрининга (отборочных реакций)

Контроль за лечением сифилиса
Применяются нетрепонемные тесты,так трепонемные тесты остаются положительными продолжительное время после лечения,а иногда всю жизнь.

Что такое нетрепонемные тесты

Нетрепонемные тесты определяют антитела класса IgG и IgM к липидам(фосфолипидам),
липопротеинам, высвобождаемых из поврежденных клеток хозяина, вследствии сифилитической инфекции и липидам,входящим в состав мембраны бледной трепонемы. Антилипидные антитела могут появляться не только вследствие сифилиса или других трепонематозов, но и в ответ на на некоторые острые и хронические заболевания, при которых наблюдается разрушение тканей.Антилипидные антитела (реагины) образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования.В основном нетрепонемные тесты применяются в двух случаях:

  • Нетрепонемные тесты, в связи с дешевизной,доступностью простотой и быстрым сроком исполнения, применяются для скрининга сифилиса как отборочные реакции.
  • По изменению количественных нетрепонемных тестов судят о степени эффективности лечения сифилиса и устанавливают его излеченность.Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами для установки диагноза сифилиса и проводятся до начала лечения,в процессе лечения и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

Снижение титров нетрепонемных тестов в 4 и более раза
в течении года после лечения подверждает эффективность проведенной терапии сифилиса и является критерием его излеченности( Приказ Минздрава РФ № 87 от 26.03.01 г,МЗ РФ Приказ от 25 июля 2003 г. N 327,Рекомендации CDC (USA) 2006)

В качестве антигена для проведения нетрепонемных тестов используется стандартный кардиолипин-лецитин -холестероловый антиген (который является одним из компонентов тканей человеческого организма и содержит липиды, характерные для бледной трепонемы) для проведения микрореакции преципитации,в случае определения реагинов реакцией связывания комплимента(реакции Вассермана),помимо кардиолипинового антигена применяют еще и ультразвуковой дезинтеграт культуральных трепонем (трепонемный антиген).К нетрепонемный тестам относят:

  • RPR (Rapid Plasma Reagins) тест быстрых реагинов (российский аналог микрореакция преципитации МР)
  • VDRL (Venereal Disease Research laboratory)
  • Реакция связывания комплимента (реакция Вассермана)

Недостатки нетрепонемных тестов

  • Ложноотрицательные результаты — при исследовании неразведенных образцов сыворотки, содержащих большое количество антител,за счет так называемого феномена прозоны. Это явление может наблюдаться на ранних стадиях сифилиса и у пациентов с сопутствующей ВИЧ-инфекцией.
  • Недостаточная чувствительность для диагностики поздней стадии сифилиса
  • Ложноположительные результаты (биологические ложноположительные реакции) при наличии других острых или хронических заболеваний.

Что такое трепонемные тесты

Как и при нетрепонемных тестах при проведении трепонемных тестов используется иммунологическая реакция антиген-антитела.Но в качестве антигенов применяются трепонемные антигены — либо интактные трепонемы либо очищенные и ультраозвученные трепонемы либо рекомбинантные антигены.Для проведения и обнаружения результатов реакции антиген-антитела используют более сложные и дорогие различные методы.Наиболее часто используются следующие трепонемные тесты.

  • Реакция иммунофлюоресценции (РИФ -FTA) в различный модификациях
  • Реакция пассивной агглютинации (РПГА — TPHA)
  • Иммуноферментный анализ (ИФА -EIA) в том числе рекомбинатный ИФА
  • Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)
  • Иммуноблотинг

Трепонемные тесты являются подтверждающими сифилис тестами,однако в небольшом проценте при их проведении могут встречаться ложноположительные результаты.
Трепонемные тесты применяются только для диагностики сифилиса и не используются для проведения контроля излеченности.

Что такое иммуноблотинг

Иммуноблотинг (Western blot) для определения специфических IgM либо IgG является одним из современных и точных методов диагностики сифилиса.При проведении иммуноблотинга T.pallidum подвергаются электрофорезу , в результате чего происходит разделение белковых иммунодетерминант. Затем проводится обработка разделенных точек — blots исследуемой сывороткой и антителами к IgG либо IgM, помеченных ферментами или радиоактивными веществами. Выявленные с помощью иммуноблотинга определенные иммунодетерминанты являются диагностическими признаками сифилиса.
IgG-иммуноблотинг (IgG Western blot)по чувствительности и специфичности соответствует РИФ-абс.IgM -иммуноблотинг (IgM Western blot) применяется как диагностический тест при врожденном сифилисе.

Какая динамика серологических реакций при сифилисе

Антилипидные (неспецифические) антитела образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования.Специфические противотрепонемных антител класса IgM,обнаруживатся в конце второй недели заболевания. IgG к трепонемным антигенам появляются приблизительно через 4 недели после начала заболевания.К моменту появления клинических симптомов сифилиса в сыворотке крови пациентов можно выявить как специфические IgM, так и специфические IgG (суммарные антитела).Параметры иммунного ответа могут изменяться в результате проводимого лечения.Адекватное лечение раннего сифилиса приводит к быстрому снижению титров неспецифических антител и специфических IgM, при этом специфические IgG обычно сохраняются в сыворотке крови в течение длительного периода времени,а иногда и всю жизнь.
Сроки появления положительных серологических реакций при сифилисе

Положительная РИБТ

Противотрепонемные IgG положит. РИФ,ИФА,РПГА

Противотрепонемные IgM положит. Ig M — ИФА/IgM -иммуноблотинг

Реагины (IgM + IgG) положит. МР (RPR/VDRL)

лимфаденит

полиаденит

инкубац. период

шанкр

первичная розеола

нед

Частота положительных результатов серореакций при разных стадиях сифилиса

Как интерпретировать тесты на сифилис

В мировой медицинской практике для диагностики сифилиса используют три реакции: нетрепонемный тест — RPR или VDRL и два трепонемных тестов — реакцию иммунофлюоресценции ( РИФ-FTA) и реакцию пассивной гемоагглютинации (РПГА — TPHA)

RPR,VDRL

РИФ (FTA)

РПГА (TPHA)

Интерпретация

нет сифилиса или инкубационный период
или очень ранняя стадия

+

+

+

нелеченый или недавно леченый сифилис

+

+

первичный сифилис или
ложноположительные РПР и РИФ

+

+

ложноположительные РПР и РПГА или
ложноотрицательная РИФ

+

+

леченый сифилис или нелеченый поздний
сифилис

+

биологическая ложноположительная
реакция

+

ранний первичный сифилис или недавно
леченый сифилис или ложноположительная РИФ

+

пролеченый сифилис или
ложноположительная РПГА

В России для диагностики сифилиса еще применяют реакцию связывания комплимента (реакцию Вассермана) и реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)
Первичный сифилис
При первичном серонегативном периоде сифилиса бывают положительные РИФ и Ig ИФА как наиболее чувствительные серореакции. Однако это не является основанием для постановки таким больным диагноза первичного серопозитивного сифилиса.У ряда больных в этом периоде бывает изолированный положительный результат при постановке реакции Вассермана с трепонемными или с кардиолипиновым антигенами. В конце 3-й или в течение 4-й недели после появления шанкра становятся положительными стандартные серологические реакции — с этого момента начинается первичный серопозитивный период сифилиса. На 1-2-й неделе первичного серопозитивного сифилиса отмечается увеличение степени позитивности серореакции (1+, 2+, 3+) и нарастание титра реагинов (1:5, 1:10, 1:20). РИФ и ИФА уже у всех больных дают резко положительный результат, но РИБТ, как правило, отрицательная или процент иммобилизации очень низок. Диагноз первичного серопозитивного сифилиса ставится и тем больным, у которых осадочные реакции и реакция Вассермана с неспецифическими антигенами дали даже однократный слабоположительный результат. При дальнейшем течении первичного сифилиса все серологические реакции становятся резко положительными (4+); титр реагинов достигает 1:80, 1:160, РИФ продолжает быть резко положительной, но РИБТ у большинства больных еще остается отрицательной или может стать слабоположительной.
Вторичный сифилис
При вторичном свежем сифилисе резко положительный результат по всем стандартным серологическим реакциям наблюдается почти в 100% наблюдений; титр реагинов наиболее высок — 1:160; 1:240 или 1:320. РИФ — 4+; РИБТ дает положительнй результат более чем у половины больных, однако процент иммобилизации трепонем невысок (40-60%).
При вторичном рецидивном сифилисе положительный результат по стандартным серологическим реакциям отмечается в 96-98% наблюдений. Отрицательные результаты могут иногда объясняться малосимптомным рецидивным течением, наличием астенизации и сочетанием сифилиса и ВИЧ-инфекции. РИБТ дает положительный результат у 85-90% больных при выраженной степени иммобилизации — 80-90-100%.
Третичный сифилис
Третичный сифилис характеризуется положительными результатами по стандартным серологическим реакциям в 50-90% наблюдений и положительной РИБТ у 92-100% пациентов с высоким процентом иммобилизации.
Скрытый сифилис
Диагноз скрытого серопозитивного сифилиса, как указывалось выше, устанавливают только по положительным серореакциям в крови с обязательным подтверждением их по РИБТ, так как только РИБТ (и в меньшей степени РИФ) позволяет отдифференцировать ложноположительные серореакции (даже с позитивностью в 2+ или 3+) от истинно положительных.
Нейросифилис и висцеральный сифилис
Разные формы сифилиса нервной системы и висцерального сифилиса имеют различную частоту и выразительность стандартных серореакции. Так, прогрессивный паралич в 100% случаев сопровождается резко положительными всеми стандартными серологическими реакциями. Сифилис сосудов мозга, спинная сухотка, сифилитическое поражение сердечно-сосудистой системы сопровождаются положительными серореакциями лишь в 40-50-60% наблюдений. Однако РИБТ почти при всех перечисленных патологических состояниях дает резко положительный результат (90-100% иммобилизации).
Врожденный сифилис
При диагностировании врожденного сифилиса в первые 2 мес после рождения стандартные серологические реакции у ребенка не определяют, т. к. они могут быть положительными за счет пассивной передачи реагинов через плаценту. По этой же причине не имеет значение и положительный результат РИБТ. Пассивно переданные от матери ребенку имобилизины самопроизвольно исчезают в течение 6 мес после рождения. Если ребенок инфицируется незадолго до родов, то в этом случае РИБТ будет еще отрицательной (в связи с более поздним образованием иммобилизинов), несмотря на наличие в организме ребенка сифилитической инфекции.
При врожденном сифилисе детей грудного возраста с активными проявлениями стандартные серореакции могут быть отрицательными в 1% наблюдений.При врожденном сифилисе раннего детского возраста отрицательные стандартные серореакции варьируют от 15 до 20%, но в этих случаях РИБТ дает положительные данные у 90-98% детей.При позднем врожденном сифилисе даже при наличии активных проявлений стандартные серореакции констатируются лишь у 70-80% обследованных, но зато РИБТ четко положительная у 100% больных с высоким титром иммобилизинов.

Положительные серореакции при отсутствии симптомов сифилиса

Это самый сложный вопрос в сифилидологии — положительные серореакции на сифилис при отсутствии клинических симптомов.
Различают пять ситуаций
Скрытый сифилис

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные (хотя при позднем скрытом сифилисе — давность заболевания более 2 лет -могут быть отрицательные)
  • нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации — проведении лечения скрытого сифилиса по существующим инструкциям
Серопозитивность после лечения сифилиса

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или отрицательные — значения не имеет
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные,отмечается снижение титров в течении года в 4 и более раза
  • есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации:Если контрольные тесты не проводились — назначается количественный нетрепонемный тест (МР) в течении года с интервалом в 3 месяца
Серорезистентность после лечения сифилиса

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или отрицательные — значения не имеет
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные,отмечается их стабильность или снижение титров в течении года менее чем в 4 раза
  • есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации:Дополнительное лечение сифилиса
Излеченный сифилис

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — отрицательные
  • есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Рекомендации:Снятие с учета
Если нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении сифилиса в прошлом см.ситуация №1 или дополнительно:
-исключить ранний сифилис (серонегатив)- контрольный трепонемный и нетрепонемный тест через 2 недели
-исключить поздний скрытый сифилис — исследование ликвора,клинико-рентгенологическое исследование
-исключить ложноположительный трепонемный тест (провести 2-3 трепонемных теста,включая РИБТ) в динамике
-исключить невенерический трепанематоз
-провести лечение позднего скрытого сифилиса по существующим методикам.
Ложноположительные реакции на сифилис

  • трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) отрицательные
  • нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные
  • наличие документированных свидетельств о полученном адекватном лечении сифилиса не имеет значения

Рекомендации:Выяснение причин ложноположительных реакций (АФС,коллагенозы,онкология,туберкулез,беременность и.т.д.)

Где можно получить еще информацию

Подбор статей и резюме статей по теме из PubMed (National Library of Medicine)

Темнопольная микроскопия
Ложноположительные результаты серореакций на сифилис
Микрореакция преципитации МР
Реакция Вассермана (РВ)
Реакция иммунофлюоресценции РИФ (FTA)
Реакция пассивной гемоагглютинации РПГА (TPHA)
Реакция иммобилизации РИБТ
Иммуноферментный анализ ИФА (EIA)

  • The value of darkfield microscopy in the differential diagnosis of secondary syphilis (Calif West Med. 1926 ) Full text
  • Результаты сравнительного изучения диагностической эффективности ряда современных нетрепонемных и трепонемных тестов
  • Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis (Clin Microbiol Rev. 1995) Full text
  • Dark ground microscopy and treponemalserological tests in the diagnosis of early syphilis

посещений 247156 обновлено 01.07.10

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *